Cytologie et cytométrie en flux - Interaction dans la démarche menant au diagnostic des hémopathies
Durée
3 jours, 21 heures
Modalité
Objectifs
Maîtriser les principes de la cytologie et de la cytométrie en flux dans le diagnostic des hémopathies
Appliquer les avancées technologiques en hématologie pour améliorer le diagnostic et l'évaluation pronostique des hémopathies
Utiliser efficacement la cytométrie en flux pour diagnostiquer les hémopathies myéloïdes et lymphoïdes et évaluer la maladie résiduelle
Prérequis
Pratique de la cytologie hématologique
Public cible
Technicien, Biologiste, Ingénieur, Chercheur
Financement
- OPCO
- France Travail
Programme
Reconnaître l'hématopoïèse et la cytologie normales
- Lieux de l'hématopoïèse selon l'âge (moelle osseuse, foie foetal, etc.)
- Étapes de différenciation des lignées myéloïde et lymphoïde
- Identification morphologique des précurseurs (myéloblastes, promyélocytes...)
- Cytologie des cellules matures (GR, plaquettes, polynucléaires, lymphocytes)
- Différences de morphologie entre frottis sanguin et moelle
- Aspect normal des noyaux, cytoplasmes, granulations, vacuoles
Identifier les principes fondamentaux de la cytologie et la cytométrie en flux
- Rappel
- Applications en hématologie
Identifier les principes généraux de la classification des hémopathies myéloides et lymphoïdes
- Leucémies aiguës
- Hémopathies lymphoïdes
Définir l'importance des marqueurs moléculaires et cytogénétiques dans le diagnostic et le suivi des hémopathies
- Nouveaux marqueurs moléculaires et cytogénétiques
- Utilisation dans le diagnostic et l'appréciation du pronostic des hémopathies
Déterminer l'importance de la détection de la maladie résiduelle
- Techniques pour la détection de la maladie résiduelle
- Dernières avancées technologiques
- Utilisation de la biologie moléculaire et de la cytométrie en flux dans le suivi des hémopathies
Utiliser la cytométrie en flux pour le diagnostic et le suivi des hémopathies myéloïdes et lymphoïdes : application pratique 12
- Leucémies aiguës
- Hémopathies lymphoïdes
Définir les principes de fonctionnement d'un automate à nfs et d'un cytomètre en flux
- Principe de l'impédancemétrie (comptage basé sur la variation de conductivité)
- Diffusion de la lumière (FSC, SSC) en cytométrie optique
- Marquage des cellules avec anticorps fluorescents
- Composition d'un cytomètre en flux (lasers, filtres, photomultiplicateurs)
- Paramètres mesurés par l'automate NFS : GR, GB, plaquettes, indices
- Affichage graphique : histogrammes, dot plots, flags d'alerte
- Différences entre analyse quantitative (NFS) et phénotypique (CMF)
Identifier les pièges dans l'analyse d'un automate à nfs ou d'un cytomètre en flux
- Causes d'erreurs pré-analytiques : échantillons hémolysés, coagulum, délai
- Interférences biologiques : leucocytose, cryoglobulinémie, microcytose sévère
Fausse thrombopénie par agrégation plaquettaire - Flags suspects non spécifiques en NFS automatisée
- Faux positifs ou faux négatifs en cytométrie (mauvais marquage, compensation)
- Importance du frottis sanguin dans la validation manuelle
Citer les principes généraux de la classification des hémopathies
- Les principales hémopathies myéloïdes et lymphoïdes
- Les grands principes de la classification des hémopathies
- La classifciation OMS 2022
Énumérer les principaux phénotypes normaux et anormaux des cellules hématopoïétiques
- Phénotype des cellules souches hématopoïétiques : CD34+, CD117+
- Marqueurs des lignées myéloïdes : CD13, CD33, MPO
- Marqueurs des lymphocytes B : CD19, CD20, CD10
- Marqueurs des lymphocytes T : CD3, CD4, CD8
- Marqueurs NK : CD16, CD56
- Phénotypes anormaux : co-expression inhabituelle, absence de marqueurs attendus
- Utilisation des panels d'anticorps standards selon les pathologies suspectées
Définir les principes d'analyse en cytogénétique et biologie moléculaire et leurs avantages, limites et place dans le diagnostic des hémopathies
- Principe du caryotype conventionnel sur moelle osseuse
- Techniques FISH ciblant des anomalies spécifiques (ex. BCR-ABL, PML-RARA)
- RT-PCR pour la détection des transcrits de fusion
- NGS pour le séquençage de panels de gènes impliqués dans les hémopathies
- Sensibilité et spécificité comparées des différentes techniques
- Délai de rendu des résultats et contraintes logistiques
- Intégration des résultats dans les classifications OMS/ELN
Identifier les principales anomalies chromosomiques et moléculaires recherchées en hématologie
- Anomalies récurrentes des leucémies aiguës : t(8;21), t(15;17), inv(16)
- Translocation t(9;22) dans la LMC et certaines LAL
- Mutations fréquentes : NPM1, FLT3, DNMT3A, JAK2, TET2, ASXL1
- Délétions ou trisomies caractéristiques des syndromes myélodysplasiques
- Intérêt pronostique et/ou thérapeutique des anomalies détectées
Citer les avantages et limites de ces différentes méthodes
- CMF : rapide, sensible, mais dépend du panel et de l'expertise
- RT-PCR : excellente sensibilité mais limitée aux anomalies connues
- NGS : vision globale mais délai et coût plus élevés
- Accès variable aux technologies selon les établissements
Identifier les avantages, limites et place de la cmf dans le diagnostic des hémopathies
- Capacité à analyser rapidement des milliers de cellules
- Identification fine des populations anormales par marquage multi-antigène
- Sensibilité dans le diagnostic des leucémies et lymphomes
- Surveillance de la maladie résiduelle
- Dépendance à l'expertise pour l'analyse et l'interprétation
- Limites techniques : chevauchement des signaux, variabilité inter-laboratoires
- Complémentarité avec la biologie moléculaire et la cytogénétique
Interpréter un immunophénotypage à l'aide d'exemples
- Lecture des histogrammes : dot plots, histogrammes, diagrammes biaxiaux
- Gating successif pour identifier les sous-populations cellulaires
- Analyse de cas types : LAL B, LAL T, LAM, LLC, LNH B
- Corrélation avec les données cliniques, NFS, cytologie
- Reconnaissance des phénotypes aberrants dans les leucémies
Définir la maladie résiduelle
- Définition : persistance de cellules leucémiques après traitement en rémission
- Concept de seuil de détection inférieur au microscope
- Importance pronostique dans les leucémies aiguës
- Recommandations internationales (ELN, GRAALL) sur l'usage de la MRD
- Impact sur les décisions thérapeutiques (greffe, intensification)
Différencier les principales méthodes d'évaluation de la maladie résiduelle
- Cytométrie en flux vs RT-PCR vs NGS
- Choix de la méthode selon la pathologie, le gène cible et la disponibilité
- Importance de la reproductibilité inter-laboratoires
Méthodes pédagogiques
Alternance de méthodes pédagogiques variées, adaptées aux différentes compétences à acquérir. Des cours magistraux permettront aux stagiaires d'acquérir les connaissances théoriques nécessaires, tandis que des travaux pratiques leur permettront de se familiariser avec les techniques d'analyse et de diagnostic. Des études de cas seront également proposées, afin d'encourager les stagiaires à développer leur esprit d'analyse et de synthèse.
Modalités d'évaluation
Une évaluation formative sera réalisée tout au long du programme afin de permettre aux formateurs de fournir un retour régulier aux participants et de les aider à progresser dans leur apprentissage. Elle pourra prendre la forme d'exercices pratiques, de discussions de groupe ou de QCM.
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